高效液相色譜法的優(yōu)點(diǎn)和常見問題?
時(shí)間:2022-09-27 來源:fzflxx.com 作者: 我要糾錯(cuò)
高效液相色譜法的主要優(yōu)點(diǎn)是:
(1)分辨率高于其他色譜方法;
(2)速度快,十分鐘至十分鐘即可完成;
(3)高可重復(fù)性;
(4) HPLC柱可重復(fù)使用;
(5)全自動(dòng)操作,分析精度高。
根據(jù)分離過程中溶質(zhì)分子與固定相相互作用的不同,高效液相色譜可分為液液色譜、離子交換色譜、液固色譜、和體積排除色譜四種基本類型。
高效液相色譜法廣泛應(yīng)用于生物領(lǐng)域,用于以下產(chǎn)品的分離和鑒定:
(1)氨基酸及其衍生物;(2)有機(jī)酸;(3)抗生素;(4)生物堿;(5)核酸及其降解產(chǎn)物;(6)糖;(7)卟啉;(8)類固醇;9 .蛋白質(zhì)、酶和多肽;(10)脂質(zhì)等。
高效液相色譜法常見的問題有:
1.渦流擴(kuò)散
當(dāng)流動(dòng)相與較大的固體顆粒碰撞時(shí),就會(huì)產(chǎn)生渦流,就像流水與石頭碰撞一樣。如果柱內(nèi)填充不均勻,部分部位疏松或有細(xì)槽,流動(dòng)相速度快;如果某些部位結(jié)塊或安裝緊密,流動(dòng)就會(huì)變慢,多條流動(dòng)路徑會(huì)快慢不一,會(huì)使區(qū)域變寬。
2. 分子擴(kuò)散
分子擴(kuò)散是指物質(zhì)分子從高濃度區(qū)域向低濃度區(qū)域的運(yùn)動(dòng),又稱縱向分子擴(kuò)散。為了減少分子的擴(kuò)散,應(yīng)該使用小而均勻的固體顆粒進(jìn)行柱載。
3.傳質(zhì)
分離出的物質(zhì)應(yīng)在流動(dòng)相和固定相中平衡,形成窄帶。在液相色譜法中,溶質(zhì)分子在兩液相之間分布或在固相上吸附和解析需要一定的時(shí)間。
4. 流動(dòng)相流量
當(dāng)流速過低時(shí),分子擴(kuò)散嚴(yán)重,特別是在氣相色譜中。如果將理論塔板的高度與流速繪制成曲線,則理論塔板的高度隨著流速的增加而迅速減小。當(dāng)達(dá)到最小值時(shí),流速再次增大,理論塔板高度再次增大,傳質(zhì)起主要作用。
以上就是有關(guān)于高效液相色譜法的主要優(yōu)點(diǎn)和常見問題介紹,如果您還想了解關(guān)于儀器資訊,歡迎咨詢客服人員了解。
(1)分辨率高于其他色譜方法;
(2)速度快,十分鐘至十分鐘即可完成;
(3)高可重復(fù)性;
(4) HPLC柱可重復(fù)使用;
(5)全自動(dòng)操作,分析精度高。
根據(jù)分離過程中溶質(zhì)分子與固定相相互作用的不同,高效液相色譜可分為液液色譜、離子交換色譜、液固色譜、和體積排除色譜四種基本類型。
高效液相色譜法廣泛應(yīng)用于生物領(lǐng)域,用于以下產(chǎn)品的分離和鑒定:
(1)氨基酸及其衍生物;(2)有機(jī)酸;(3)抗生素;(4)生物堿;(5)核酸及其降解產(chǎn)物;(6)糖;(7)卟啉;(8)類固醇;9 .蛋白質(zhì)、酶和多肽;(10)脂質(zhì)等。
高效液相色譜法常見的問題有:
1.渦流擴(kuò)散
當(dāng)流動(dòng)相與較大的固體顆粒碰撞時(shí),就會(huì)產(chǎn)生渦流,就像流水與石頭碰撞一樣。如果柱內(nèi)填充不均勻,部分部位疏松或有細(xì)槽,流動(dòng)相速度快;如果某些部位結(jié)塊或安裝緊密,流動(dòng)就會(huì)變慢,多條流動(dòng)路徑會(huì)快慢不一,會(huì)使區(qū)域變寬。
2. 分子擴(kuò)散
分子擴(kuò)散是指物質(zhì)分子從高濃度區(qū)域向低濃度區(qū)域的運(yùn)動(dòng),又稱縱向分子擴(kuò)散。為了減少分子的擴(kuò)散,應(yīng)該使用小而均勻的固體顆粒進(jìn)行柱載。
3.傳質(zhì)
分離出的物質(zhì)應(yīng)在流動(dòng)相和固定相中平衡,形成窄帶。在液相色譜法中,溶質(zhì)分子在兩液相之間分布或在固相上吸附和解析需要一定的時(shí)間。
4. 流動(dòng)相流量
當(dāng)流速過低時(shí),分子擴(kuò)散嚴(yán)重,特別是在氣相色譜中。如果將理論塔板的高度與流速繪制成曲線,則理論塔板的高度隨著流速的增加而迅速減小。當(dāng)達(dá)到最小值時(shí),流速再次增大,理論塔板高度再次增大,傳質(zhì)起主要作用。
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